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ames试验 Ames试验的准备（一）仪器及器皿
1．仪器：双人双面洁净工作台、液氮罐、37C生化培养箱、恒温水浴箱、Ph测试仪、高压蒸汽灭菌器和干燥箱等。
2. 器皿：培养皿，配置用器皿，细菌接种环，滤膜片，移液枪及移液管灭菌干燥待用，紫外灯，尺子，秒表，无菌棉签等。
（二）鉴定菌株
1．计算所需平皿数，足够清洁的平皿用牛皮纸或棉布包好，放入高压蒸汽灭菌器灭菌，121°C，20min,然后置于干燥箱内烘干待用；
2.配制鉴定用培养基
1）营养肉汤培养基
2) 营养肉汤琼脂培养基平皿和斜面
3）上层培养基
4）底层培养基：
a) ＶＢ液
b) ２０％葡萄糖溶液
3.配制鉴定菌株用试剂：
1)0.1%结晶紫水溶液
2) 0.8%氨苄青霉素碱性溶液
3) 0.8%四环素酸性溶液
4)0.1mol/L组氨酸溶液
5)0.5mmol/L生物素溶液
4.菌种准备
5.菌株鉴定
1）组氨酸需求试验（组氨酸营养缺陷鉴定）
2） 结晶紫敏感试验（深粗糙型rfa鉴定）
3）紫外线敏感试验（ △ uvrB缺失的鉴定）
4）抗氨苄青霉素试验（R因子—抗氨苄青霉素的鉴定）
5)抗四环素试验（带质粒pAQl的鉴定）
5 自发回变试验
（三）菌株保存
基因型和生物学特性合格者，保存。
（四）增菌培养：
（五）试剂及培养基
除说明外，应是化学纯，无诱变性。
避免重复高温处理，选择适当保存温度和期限。
1.鉴定菌株用试剂：
2.配制培养皿用试剂
1）Vogel-Bonnet液10×(10倍浓缩)：
用途：用于配制底层培养基。
2）20%葡萄糖溶液
3.培养基
1 营养肉汤培养基；
2 营养肉汤琼脂培养基；
3 底层培养基；
4 表层培养基；
（六）S9活化系统
10%Ｓ9混合液的配制：每10ml由以下成分组成，临时配制。（预试验大概需要11ml）
灭菌蒸馏水 3.8ml
磷酸盐缓冲液（0.2mol/L,pH7.4） 5.0ml
1.65mol/L氯化钾-0.4mol/L氯化镁溶液0.2ml
葡萄糖-6-磷酸溶液（0.05mol/L） 40µmol
辅酶Ⅱ液（0.05mol/L） 50µmol
肝S9液 1.0ml
混匀，置冰浴待用。
（七）对照
本实验阳性对照物见下表：
Ames试验常用阳性对照
S9
TA97
TA98
TA100
TA102
TA1535
-
三硝基芴酮0.2µg/皿
三硝基芴酮0.2µg/皿
叠氮钠
1.5µg/皿
叠氮钠
1.5µg/皿
丝裂霉素
0.5µg/皿
+
2-氨基芴
10µg/皿
2-氨基芴
10µg/皿
2-氨基芴
10µg/皿
2-氨基芴10µg/皿或环磷酰胺200µg/皿
1,8-二羟基蒽醌
50µg/皿
。